国产99久久精品_欧美日本韩国一区二区_激情小说综合网_欧美一级二级视频_午夜av电影_日本久久精品视频

最新文章專題視頻專題問答1問答10問答100問答1000問答2000關鍵字專題1關鍵字專題50關鍵字專題500關鍵字專題1500TAG最新視頻文章推薦1 推薦3 推薦5 推薦7 推薦9 推薦11 推薦13 推薦15 推薦17 推薦19 推薦21 推薦23 推薦25 推薦27 推薦29 推薦31 推薦33 推薦35 推薦37視頻文章20視頻文章30視頻文章40視頻文章50視頻文章60 視頻文章70視頻文章80視頻文章90視頻文章100視頻文章120視頻文章140 視頻2關鍵字專題關鍵字專題tag2tag3文章專題文章專題2文章索引1文章索引2文章索引3文章索引4文章索引5123456789101112131415文章專題3
問答文章1 問答文章501 問答文章1001 問答文章1501 問答文章2001 問答文章2501 問答文章3001 問答文章3501 問答文章4001 問答文章4501 問答文章5001 問答文章5501 問答文章6001 問答文章6501 問答文章7001 問答文章7501 問答文章8001 問答文章8501 問答文章9001 問答文章9501
當前位置: 首頁 - 生活 - 知識百科 - 正文

設計引物的方法和原則

來源:懂視網 責編:小采 時間:2020-11-19 05:05:58
文檔

設計引物的方法和原則

引物長度一般為15-30bp,不能大于38bp。引物GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之間,Tm值曲線以選取72度附近為佳,5'到 3的下降形狀也有利于引物與模板的結合。
推薦度:
導讀引物長度一般為15-30bp,不能大于38bp。引物GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之間,Tm值曲線以選取72度附近為佳,5'到 3的下降形狀也有利于引物與模板的結合。

什么是引物設計原則,一起來看看小編今天的分享吧。

  1、引物長度一般為15-30bp,常用的為18-27bp,但不能大于38bp。

  2、引物GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。

  3、引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之間,Tm值曲線以選取72度附近為佳,5'到 3’的下降形狀也有利于引物與模板的結合。

  4、ΔG值(自由能)反應了引物與模板結合的強弱程度,3'端的ΔG值相對要低,且絕對值不要超過9,否則不利于正確引發反應,3'末端雙鏈的ΔG值在0--2kcal/mol時,PCR產量幾乎達到百分之百,但在-6時只達到40%,-8時少于20%,-10時接近于0。

  5、錯配率一般不要超過100,否則會出現非目的條帶。但對于某些特定的模板序列,還應結合比較其在正確位點的引發效率。如果兩者相差很大,比如在正確位點的引發效率為340以上,而在錯誤位點的引發效率為110,并且不好找到其他更合適的引物,那么這對引物是可以接受的。

  6、Frq曲線為Oligo6軟件新引進的一個指標,解釋了序列片段存在的重復幾率大小,選取引物時,應該用Frq值相對較低的片段。

  7、引物二聚體及發卡結構的能量的絕對值一般不要超過4.5,否則容易產生引物二聚體而且會降低引物濃度從而導致PCR不能正常發生。

  8、3'端最好不要是連續堿基,GGG或CCC會導致錯誤的引發,同時3'端最后一個堿基最好不要是A或T,若是,會導致錯配。

  9、以公式Tm=4*(G+C)+2*(A+T)-5計算Tm值,也就是退火溫度。選擇較低Tm值的引物的退火溫度為反應的退火溫度,最好保證每個引物的Tm值相匹配,且在70-75℃范圍內。

  10、模板與穩定性較小的引物之間的Tm的差異越小,PCR的效率越高。因為解鏈溫度也取決于它的長度,如果期待的產物長度等于或小于500bp,選用端的引物(16-18bp),如果產物長5kb,則用24bp的引物。

  11、在DNA測序和PCR中最好用5'末端穩定(GC含量多),而3'端不穩定(AT含量多)的引物,這種引物的結構可以有效地消除假引發反應。

  12、引物和產物之間的Tm值相差別太大,20攝氏度范圍內最好。

  13、對引物的修飾一般在5'端進行,例如加酶切位點,加酶切位點的同時要根據需要添加保護堿基。

聲明:本網頁內容旨在傳播知識,若有侵權等問題請及時與本網聯系,我們將在第一時間刪除處理。TEL:177 7030 7066 E-MAIL:11247931@qq.com

文檔

設計引物的方法和原則

引物長度一般為15-30bp,不能大于38bp。引物GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之間,Tm值曲線以選取72度附近為佳,5'到 3的下降形狀也有利于引物與模板的結合。
推薦度:
標簽: 方法 it 原則
  • 熱門焦點

最新推薦

猜你喜歡

熱門推薦

專題化簡比的方法專題化簡比的過程專題單細胞生物的結構層次專題早戀的特點專題早戀的表現專題早戀的危害和例子專題早戀的表現在哪幾個方面專題早戀的具體表現專題早戀有哪些特征專題細胞質的結構和功能專題dna分子的結構是什么結構專題細胞的基本結構和功能專題早戀的危害例子專題因子分析法詳細步驟專題primer設計引物專題引物設計原則專題引物設計專題早戀危害的例子專題早戀有什么特征專題不屬于結構化程序設計方法專題
Top
主站蜘蛛池模板: 国产成人久久精品亚洲小说 | 国产亚洲午夜精品a一区二区 | 中文字幕欧美日韩 | 亚洲自拍偷拍网 | 欧美日韩不卡在线 | 亚洲国内精品 | 亚洲视频网站在线观看 | 国产激情在线观看 | 色综合久久中文字幕综合网 | 欧美激情一区二区三区不卡 | 亚洲入口 | 国内视频一区二区三区 | 日本三级韩国三级韩级在线观看 | 亚洲伊人网站 | 国产91成人精品亚洲精品 | 国产精品高清在线观看 | 日韩大片免费观看视频播放 | 日本高清天码一区在线播放 | 大陆一级毛片 | 日韩理论在线 | 国产一区二区三区视频 | 欧美日韩一区二区在线观看 | 欧美成人高清在线视频大全 | 成人99国产精品一级毛片 | 日本精品一区二区三区在线观看 | 欧美整片第一页 | 综合 欧美 亚洲日本 | 欧美日本一区二区三区 | 91精品日本久久久久久牛牛 | 亚洲视频五区 | 国产日韩在线播放 | 国产在线精品一区二区 | 亚洲精品第1页 | 欧美日韩精品高清一区二区 | 日韩αv | 91大神在线精品视频一区 | 成人精品视频一区二区三区 | 亚洲尹人九九大色香蕉网站 | 在线观看国产黄色 | 九九国产精品视频 | 日韩 欧美 综合 在线 制服 |